作者willieh (willie)
看板Biotech
标题Re: [求救]Protein从SDS-PAGEtransfer至PVDF的问题
时间Sat Jan 12 21:25:40 2008
※ 引述《willieh (willie)》之铭言：
: 请问各位，
: 我在做SDS-PAGE transfer至PVDF时，
: 发现我的Pre-stained marker变得很淡，
: 因此想请教各位，
: protein有可能transfer过头而离开PVDF吗？
: 还是变淡是因为染剂脱离protein而已？
嗯嗯，我想我说一下我的情况好了，
我是用湿式transfer，8x6 cm的PVDF，400 mA，60 mins
buffer含25mM Tris, 192mM glycine, 0.1% SDS, 15% methanol。
因为pre-stained marker在PAGE上非常清楚，
但是在transfer後几乎没有了，
PVDF上淡的可怜....
因此想到几个问题：
会不会是transfer过头了？
但是在PVDF上的protein会容易过头吗？还是只是染剂跟protein脱离？
当然推文的sGoat您说gel跟membrane非密合这点我也蛮同意....
还有其他可能或建议吗？
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.253.121
※ 编辑: willieh 来自: 140.116.253.121 (01/12 21:26)
1F：推 tsubasawolfy:60min还好吧 我都一个半小时... 01/12 21:31
2F：推 borhen:我是定电流~~= =400mA 4hr or 40mA overnight 01/12 22:16
3F：推 malakaki:60分...有点少耶~ 我跑400mA 150min~175min 01/12 22:17
4F：推 bluecsky:你这样应该没过头..我猜是染剂被洗掉了.. 01/12 22:30
5F：→ tsubasawolfy:换一牌不然就加amrker量- -? 01/12 22:32
※ 编辑: willieh 来自: 125.229.44.153 (01/13 00:14)
6F：→ willieh:写错了，是400 mA.... 01/13 00:14
7F：推 jbking:400mA 一小时半到两小时效果不错 01/13 03:31
8F：推 chvkimo:PAGE上的marker都已经过去了? 01/13 12:29
9F：→ willieh:嗯，marker都过去了。 01/13 15:25
10F：推 spermegg:加marker的量应该会有帮助 01/13 18:59
11F：推 t123401221:如果PAGE上的Maker都有过去.那你要看Band应该有过去啦 01/13 20:58
12F：→ willieh:只是transfer过去的pre-stained marker颜色都淡掉了 01/14 20:45
13F：→ willieh:不清楚是颜色淡掉还是protein跑掉 01/14 20:46