※ 引述《willieh (willie)》之铭言： : ※ 引述《willieh (willie)》之铭言： : : 请问各位， : : 我在做SDS-PAGE transfer至PVDF时， : : 发现我的Pre-stained marker变得很淡， : : 因此想请教各位， : : protein有可能transfer过头而离开PVDF吗？ : : 还是变淡是因为染剂脱离protein而已？ : 嗯嗯，我想我说一下我的情况好了， : 我是用湿式transfer，8x6 cm的PVDF，400 mA，60 mins : buffer含25mM Tris, 192mM glycine, 0.1% SDS, 15% methanol。 : 因为pre-stained marker在PAGE上非常清楚， : 但是在transfer後几乎没有了， : PVDF上淡的可怜.... : 因此想到几个问题： : 会不会是transfer过头了？ : 但是在PVDF上的protein会容易过头吗？还是只是染剂跟protein脱离？ : 当然推文的sGoat您说gel跟membrane非密合这点我也蛮同意.... : 还有其他可能或建议吗？ 也有可能是你的PROTEIN没过去， 可以试着TRANSFER久点 或是TRANSFER完後，把剩下的GEL拿去做coomassie blue 染色看看 确定你的PROTEIN有完全到MEMBRANE上 -- 「如果连正义会获得最後胜利这种事情都不能相信， 那我们根本就不知道该相信什麽而活下去了……」 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 211.76.175.170