作者canongirl (变 世上唯一不变)
看板Biotech
标题[求救] Cloning 的问题
时间Sat Jan 19 21:22:14 2008
大家好，目前我手上有一个clone 要做
老师请我先去合两条primers 有53mer
序列(举例)： primer1：5'ATCGCGTGATATGTGCTCATAGCT...3'
primer2：5'TAGCGCACTATACACGAGTATCGA...3'
也就是两条完全pair，因为这53mer其中包含我要clone的insert 另外有两端各有BamHI
的切位可以接在vector上
但因为这两条是ssDNA primer 老师叫把两条primer混合在一起 然後heating
然後回到annealing 的温度，然後他们就会接在一起了@@
真的会接在一起吗？没有polymerase的帮助也可以黏在一起？
有人有过做这样cloning的经验吗 ？
天阿 救救我><
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◆ From: 219.84.233.122
1F：推 sGoat:有看没有懂@@... 01/19 21:43
2F：→ canongirl:意思就是两条primer不用polymerase就可以自己黏起来吗？ 01/19 21:50
3F：推 bider:是要做RNAi吗? pol是用来复制 DNA温度下降就可以成双股 01/19 21:51
4F：推 cutebetty:这样做没错 也可以加polymerase在尾端加A进行TA clone 01/19 21:55
5F：→ cutebetty:直接用BamH1切可能会不好切 建议先送TA再切下来 01/19 21:57