作者albertwang (会思考的鱼)
看板Biotech
标题Re: [求救] Cloning 的问题
时间Sun Jan 20 00:40:57 2008
※ 引述《canongirl (变 世上唯一不变)》之铭言：
: 大家好，目前我手上有一个clone 要做
: 老师请我先去合两条primers 有53mer
: 序列(举例)： primer1：5'ATCGCGTGATATGTGCTCATAGCT...3'
: primer2：5'TAGCGCACTATACACGAGTATCGA...3'
: 也就是两条完全pair，因为这53mer其中包含我要clone的insert 另外有两端各有BamHI
: 的切位可以接在vector上
: 但因为这两条是ssDNA primer 老师叫把两条primer混合在一起 然後heating
: 然後回到annealing 的温度，然後他们就会接在一起了@@
: 真的会接在一起吗？没有polymerase的帮助也可以黏在一起？
: 有人有过做这样cloning的经验吗 ？
: 天阿 救救我><
这我做过我是63mer
简单的就只要放到热约100度做水浴然後让温度自然的降温
等到水温跟室温(差不多50度以下也行)差不多就可以去跑胶纯化
至於buffer要专业点就仿PCR的加法DNTP TAQ 不需要
如果这样你还怕的话
那就用专业温度升降控制器请洽卖聚合连锁反应仪器的厂商
前面有一家的广告做的不错(应该知道我讲什麽吧)
一样仿PCR SOL加法不需TAQ DNTP
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