最近使用HSP90 inhibitor treat细胞 早在02年的时候就有人发表过同样的实验 我是用同样的浓度测试的 结果发现很诡异的结果 1. treat细胞1uM 24 hour然後做BrDU proliferation 测试, 数值与control同 表示细胞没死? 2. treat细胞24 hour 1uM 然後测casepase3/7活性 signficant increased 表示细胞开始死了?? caspase活性是用化学法(就是substrate辈切割之後会放萤光) 3. treat细胞2-6小时 target protein downregulated 这符合期望 (flow cytometry) 但是诡异的是......24小时的时候恢复表现 这表示 细胞把inhibitor给排出了??? 4. treat二十四小时的细胞测Annexin V and PI stain 大概有20-40%的细胞快死或者死了.... 5. treat细胞24小时, 做total protein western....target protein 完整无缺阿 可是测试PARP, 没有被切 是intact的 这下可好了 到底是有死还是没有死?? 我个人的想法 : treat细胞之後, 细胞有些丧失target protein所以开始死 可是细胞有resistant pump 把药物排出所以24小时後target protein又回来 所以rebound的状况下 虽然细胞之前有死可是还是恢复过来了 这就为啥我可以测到caspase活性 还有annexin V and subG1 area 可是rebound的後果我看到total protein相同 BrdU proliferation assay也相同 这个推论合理吗 还是有其他的idea 再02年的paper并没有看到这个情形 24 hour所有的target protein全部degrade了 --

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