作者annesamuel (as)
看板Biotech
标题[求救] PCR的问题
时间Tue Jan 22 18:20:46 2008
请问PCR product跑电泳出现smear且主要产物的band很弱
该如何解决??要稀释template吗???还是提高anneal温度???
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.117.91.184
1F：→ sGoat:touchdown PCR 01/22 18:27
2F：推 sinwam:附个图根条件大家比较好给意见吧!! 01/22 20:06
3F：→ annesamuel:不好意思我还不会张贴图正在请教别人 01/23 20:04
4F：→ annesamuel:PCR反应条件： 01/23 20:07
5F：→ annesamuel:94℃ 2 min 01/23 20:07
6F：→ annesamuel:35cycle(94℃ 1 min, 55℃ 1 min, 72℃ 2 min) 01/23 20:12
7F：→ annesamuel:72℃ 7 min 01/23 20:16
8F：推 sinwam:你的band大小!跟胶的浓度跑的时间跟速度??资料详细点! 01/23 21:20
9F：→ sinwam:会比较容易让人知道你的问题可能会出在哪!! 01/23 21:21
11F：→ annesamuel:我的PCRproduct约0.5Kb,lane 1:marker,2,4,6:sample 01/25 13:54
12F：推 sGoat:请问一下template浓度以及抽取材料及方式(kit或是protocal) 01/25 16:11
13F：→ annesamuel:我的sample是珊瑚相伴细菌抽chromosome都抽到珊瑚的DNA 01/26 03:55
14F：→ annesamuel:细菌的DNA非常少不够定量即时nest PCR,product也非常少 01/26 03:57
15F：→ annesamuel:用kit抽不到DNA,是用传统方法抽chrosomal DNA 01/26 04:00
16F：推 sGoat:能够增加你取的sample量吗?如果你sample远低於25ng/20ul的话 01/28 16:46
17F：→ sGoat:不管是进行多cycle或是多次nest好像都不能避免这种情形? 01/28 16:49