作者kutoushinji (所有人都跟我犯冲吗?)
站内Biotech
标题[求救] 做了好多遍的clone，就是接不上去，why?
时间Wed Jan 23 00:26:52 2008
我最近正在接一段基因
vector:5.8kb
insert:700bp
酵素切位:BamH1跟EcoRV
我切胶完之後，做胶纯化
(ps. 可以顺便问一下要如何做，纯度跟浓度才会高?)
然後ligation时，insert:vector=3:1
放在4度下过夜
可是我一直做不出来，我也放过16度过夜
还是接不上去
想请高人指点迷津
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.66
1F：推 zoom8080:试试TA clone完，增量後再切来皆看看... 01/23 00:36
2F：推 albertwang:用真空抽乾就可以让浓度变高罗 01/23 01:21
3F：→ kutoushinji:我做胶纯化之後的260/230都是0.多，why? 01/23 01:47
4F：推 enisx:放室温 o/n 试试 01/23 13:34
5F：推 ffeelling:我们老师说一边blunt end一边sticky end的最难接了 orz 01/26 18:17
6F：→ ffeelling:我也做过这样的clone(RE不一样) 也是试了很久 最後换别 01/26 18:18
7F：→ ffeelling:的RE了... 实在是没时间耗阿 有原po可能换切位吗? 01/26 18:20