作者Nikio (工作有够忙)
看板Biotech
标题[求救] Western怪怪说
时间Fri Jan 25 19:35:06 2008
想请教大家一些问题 ><
今天压western很怪，五分钟、十分钟 都一片空白，就狠下心给他压了3小时，
结果整片MEMBRANE都黑了，但跑出了一堆一条条白色的bands，好像位置又是我要的
protein @@ 见鬼，怎麽变成白色的呢？ 对了 连marker也变成白色的
和同学讨论结果可能是：二抗太强，把ECL在压片前就吃光光，可以解释为何第一次压
没压出来但长时间压却变白色的（被HRP吃掉以致於正确位置的protein无法显色）
不过好怪喔～如果说是我要target的protein还解释的通，为何pre-stain也变白的@@?
另外想请教大家：
如果压不好，压不出东西，或挑错压片的时间点，再加ECL去压还压的出来吗？
很怀疑在membrane上的HRP是不是真的还能用？
因为我之前做ELISA有种经验，就是不小心错过显色时间，没测到linear OD的范围，
想说：好吧！反正enzyme还是在盘子上，应该还有用，结果加下去就不呈色了！不然就是
呈色的时间拉长，或是没办法变的跟第一次加的时候一样强..大家有这种经验吗？
小好奇～就是像这些显色的enzyme，是不是作用後之後就失效，或是大幅降低酵素能
力了呢？
感恩 ><
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◆ From: 211.76.175.170
1F：推 naturer:曝光过度 01/25 19:52
2F：推 a64toto:时效过完加再多也没用喔 01/25 22:06
3F：→ a64toto:可以把ECL跟抗体洗掉重新来一次 01/25 22:06
5F：推 changyaowen:白band通常是太强造成反白 不过压久才出现 需要担心是 01/25 23:00
6F：→ changyaowen:是非专一性出现的band 不然应该一开始就压得出来 01/25 23:01
7F：→ changyaowen:专一性的band应该只会出现一条 短时间>黑 长时间>白 01/25 23:03
8F：推 ralphlee:压片时间太久了 以秒为单位试试看 用个10秒20秒~~ 01/26 10:08