※ 引述《[email protected] (工作有够忙)》之铭言： : 想请教大家一些问题 >< : 今天压western很怪，五分钟、十分钟 都一片空白，就狠下心给他压了3小时， : 结果整片MEMBRANE都黑了，但跑出了一堆一条条白色的bands，好像位置又是我要的 : protein @@ 见鬼，怎麽变成白色的呢？ 对了 连marker也变成白色的 : 和同学讨论结果可能是：二抗太强，把ECL在压片前就吃光光，可以解释为何第一次压 : 没压出来但长时间压却变白色的（被HRP吃掉以致於正确位置的protein无法显色） 是有可能 不过这也太强了吧 @.@ : 不过好怪喔～如果说是我要target的protein还解释的通，为何pre-stain也变白的@@? 有些 protein marker 会黏抗体 (无奈) : 另外想请教大家： : 如果压不好，压不出东西，或挑错压片的时间点，再加ECL去压还压的出来吗？ : 很怀疑在membrane上的HRP是不是真的还能用？ : 因为我之前做ELISA有种经验，就是不小心错过显色时间，没测到linear OD的范围， : 想说：好吧！反正enzyme还是在盘子上，应该还有用，结果加下去就不呈色了！不然就是 : 呈色的时间拉长，或是没办法变的跟第一次加的时候一样强..大家有这种经验吗？ : 小好奇～就是像这些显色的enzyme，是不是作用後之後就失效，或是大幅降低酵素能 : 力了呢？ : 感恩 >< HRP 是 peroxidase 会一直找 H2O2 来吃，所以不会这麽快失效 我的经验是一两小时内都没问题 不过洗过一次 membrane 再加 ECL 会好一些 大概跟占据 enzyme 位置的东西有关 <然而>强度可能会有差异 如果要定量的话要小心一些 -- 上Ptt3的理由, 1. 不太有人管. 小站自治. PttLaw板都砍掉了. 2. 开板很快. 因为没人申请. NewBoard板生意冷清.. 3. 不会遇到无聊人. 大都是海外留学生. 4. Ptt3==自由 本站所在地 不受中华民国各级法令管辖 欢迎流亡海外人士申请庇护 --

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