作者shuyanc (荷包大失血~~~)
看板Biotech
标题Re: [求救] Cell seeding怎麽样都不均匀.....
时间Sat Jan 26 11:48:46 2008
※ 引述《changyaowen (研究生活)》之铭言:
: ※ 引述《wadewang (小龟)》之铭言:
: : 已经种到快发疯了 看了之前的讨论也没有头绪
: : 现在的情况是种10cm dish和75T flask都没问题
: : 问题都出在3.5cm dish和 24well plate
: : seeding的方法是
: : 3.5cm dish是先加入适量medium 然後将细胞液均匀滴在dish上 总体积约1ml
: : 然後十字摇法,前後3次左右3次,重复3次 摇晃时间差约为1秒
: : 24well plate则是将细胞稀释到500ul的体积 然後均匀滴进去
: : 然後一样十字摇法,前後3次左右3次,重复3次 摇晃时间差约为1秒
: : 下场就是细胞都聚在周围
: : 中间细胞都很少
: : 到底应该怎麽摇才能均匀阿
: 基本上 我觉得上述的方法 应该不会有不匀的情况
: 如果真的不行的话 我是会在偷懒的时後这样做
: 就是 假设一个WELL要10CC的量(total medium with cells for culture)
: 就直接将你要细胞数先在tube diulte到10cc
: mix 均匀後 直接加入well 如此volume很大又先mix均匀的情况下
: 相信不怎需要摇应该是均匀且可以直接culture
: 以上纯属小弟心得 ^^
如果是 24 well 的话,我会用 1ml tip 直接在 well 中 pipet 均匀後
"静置"
就放在 larminar flow 里不要动喔 (我的细胞很耐)
放个 30min~1hr,他就不太会动了,再放入 incubator
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◆ From: 124.8.83.70
1F:推 wadewang:感谢大家的建议!! 这几个方式我会再试试看,应该可以找到 01/26 11:49
2F:→ wadewang:最好的condition!! 01/26 11:50