作者lagigi (la)
看板Biotech
标题[讨论] Western blot电泳时的band很怪
时间Sun Jan 27 16:11:12 2008
最近发现电泳时 每个band跑起来都是呈不连续状
呈现有些颗粒状
其时在sample denature後发现sample似乎就有些沉淀物
但还是把sample全load到well中 截果就出现这个情况
我确定不是胶有问题(well也有冲乾净,marker跑起来也没此现像)
我记的以前有老师说过 发现sample denature後有沉殿物
就要离心 最後只要load上清液
(ps.sample前处理是+lysis buffer离心後只取上清液 所以为何denature
会有沉淀物出现 也不清处 ,有怀疑过是SB buffer是否泡的不好)
所以想请教大家 电泳时会出现这个情况的原因 要如何改进?
sb buffer是否会让samlpe在denature出现沉淀物呢?谢谢
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 203.73.48.149
1F：推 bluecsky:sample buffer加後煮过不是都要离心吗? 01/27 17:42
2F：→ bluecsky:原因不是你的buffer问题..而是本身就有一些东西会沉殿吧 01/27 17:42
3F：→ bluecsky:不离心去跑都会这样..光是load的感觉就差很多 01/27 17:43
4F：推 laboy234:sample buffer煮过都要离心 一直以来都没有这一步 01/27 17:57
5F：→ laboy234:请问转速跟时间各多少 谢谢(这是我第一次听到的必作步骤) 01/27 17:58
6F：推 bluecsky:我是用全速(约16k G)离心5min啦..我一开始学就被教一定要 01/27 18:16
7F：→ bluecsky:做这一步说?..是很奇怪吗?每次离後底部都有一些沉淀没错 01/27 18:17
8F：→ bluecsky:而且我也试过没离心就用就真的会怪怪的.. 01/27 18:17
9F：→ bluecsky:不管是load的感觉跟跑的结果都有差 01/27 18:18
10F：推 laboy234:那定量後的CONTROL组 准吗 01/27 19:52
11F：推 yuchipeter:你的sample buffer有没有加SDS and DTT 有加会好一点 01/28 09:38