作者eyespot (追求内心的自在)
看板Biotech
标题[讨论] transfection时plasmid的大小
时间Wed Jan 30 23:32:27 2008
把一个基因的plasmid(A)跟pEGFP-C1 cotransfect (electrophoresis)
到B细胞後(4ug:1ug)，取出部分细胞，利用FACS计算GFP positive的细胞约有10％；
但同一批细胞，利用可以认A的抗体做immunofluoresence，
再用FACS分析，有染到A的细胞却只剩1％，
疑问是：cotransfection应该有GFP的就会有A表现才对，尤其A的量又比GFP多，
但为何GFP有10％，A却只剩1％ 。
有同时用表现A的stable cell当positive control，
它100％都有染到抗体，所以抗体跟染色方法应该没有问题。
甚至有用FACS 先将GFP+/GFP- 的细胞分别sorting出来，再染A，
染完的细胞再跑一次FACS，结果GFP-的细胞完全没染到是符合预期的，
GFP+的细胞却也只有30％染到A。
这问题不知道各位有没有遇过呢？
有听过人说plasmid大小会影响efficiency，A的plasmid大小为9kb，pEGFP为4.7kb，
A是比较大，但efficiency真的是因此而差这麽多吗？有点难以置信。
这个问题困扰很久了，感激各位！
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.5.35
1F：推 blence:是难以置信,但事实就摆在眼前,除非你把A接到pEGFP会好一点 01/31 00:02
※ 编辑: eyespot 来自: 140.112.5.35 (01/31 00:57)
2F：推 bluecsky:是的...大的plasmid效率就是有差 01/31 06:59
3F：推 soom:co-transfection的效果的确如此 两个plasmid不会等量 01/31 10:38