作者tinantai (小安)
看板Biotech
标题Re: [求救] Medium跑western
时间Sat Feb 16 12:32:56 2008
※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言:
: ※ 引述《[email protected] (昂 布拉股)》之铭言:
: > 最近要看一些外送到Medium中的protein
: > 所以将medium拿去跑western
: > 但是总是偶而会有band 较多时候有时候都没有讯号 而且片子的background都脏脏的
: > 我的方法是 先将约100ul的Medium加入loading dye之後下去煮过
: > 将体积煮至40~50之後 loading
: > 但是有时候煮过会发现底部有一些蓝色的沉淀物
: > 但是我还是全部loading下去
: 这种煮到乾的做法有文献可考吗?
: 感觉有点可怕
: 而且我直觉认为盐类浓度的改变会对结果造成一些难以预期的影响
: 如果是我 我会用 centricon 之类的东西来浓缩啦...
: 或者是作 IP or IP-western
我想问你的是...你的medium里有没有serum..
聚我所知..serum影响很大
跑出来会有黑色ㄧ团
我後来是用serum free...
取2-3ml的medium浓缩至50-70 ul後加 loading dye煮
然後用well比较大的去跑
我是上层胶配比较长(也就是下层胶要比较短)
然後让他跑一下下之後再把没loading完的load完
^^
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