作者AS1 (AS1)
看板Biotech
标题Re: [求救] real-time pcr的问题
时间Sat Feb 16 21:41:32 2008
※ 引述《latte366 ( )》之铭言:
: ※ 引述《AS1 (AS1)》之铭言:
: : 现在的问题是这台机器跟我没关系
: : 因为要是我的话 我绝对不会买
: : 但问题是现在买了
: 个人浅见:
: 再下觉得最大的问题不是机器
: 而是阁下的心态
我是来帮别人抱怨 不是我自己
因为我碰一次之後 我就不想碰了
更何况 我工作是跑现场
: 如果所有生技人非用过的机器不做
: 或者有实验做不出来就怪当初为何要购买
: 那台湾的生技业就真的只是如此而已
: 就您所说 对方specilist来上第二次课的时候您已接手这份工作
: 那不是就该虚心求教 为何会躲得远远的 连听都不想听呢
: 况且操作手册您也是有 居然会连翻都不想翻!?
我不是接手此工作 接手此工作的是学姊
但新人 你能给他多少工作 我变成在旁边无所事事 别人都再忙 我会不好意思
: 就您前文的叙诉 您真的了解melting curve 的意义是什麽吗
: 如果原理都没搞懂 就想上机 出了问题才来怪公司为何要买你不会用的机器
: 那我会严重怀疑阁下公司的人事遣派制度有无问题
我不了解 我也不想懂
真的要懂 我要拿双硕士才想学
: 当初面事时有无双方沟通好工作内容
我工作是跑现场
: 方便透露一下公司吗 地雷别让後面的人也踩到
台南的公司 今年过年分红三个半月
但我七月一号以後才进
没有分到
: : 130万的机器 跑不出要的产物
: : RT-PCR产物可能再两百多 结果去跑REAL-TIME PCR 结果都变成三百以上 甚至更高
: : 不然就是没有BAND
: : 关於罗氏的售後服务
: : 我们几乎每周打电话过去(每周三通以上) 就是要她们来上机试做看看
: : 结果都要三催四请
: : 现在直接跳过技术专员 直接打给经理
: : 因为技术专员时间很难等
: 我做过ABI 也做过Roche的仪器
: 个人觉得 ABI的售後服务的确是很棒!
: 但是Roche的也没像阁下说的那麽差
: 请问距离上次阁下请他们来上机 到现在隔多久呢?
机器四月买的
四月教学
第一次上机六月
我八月进公司
十月再跑一次
之後就难叫
: Roche不是只有贵公司一家客户
: 讲一句较不中听的话
: 研究设备 动辄3、4百万以上的仪器比比皆是
: 不是买了个130万的仪器就可以等人来做好自己份内该会的事了
可以不要建议我们买 就没事了 买了 要负责上机
不然干麻买
买一台做不出东西的机器干麻
: 套句星爷的话 "实验,不是这样做的"
: 个人建议您先将实验原理 仪器操作步骤弄懂
: 以及格下检体的前处理步骤弄清楚有无问题
: 包括RNA的萃取、RNA 260/280 ratio、RT的步骤、tranditional PCR、电泳
: reagent有无污染...etc
前文已说 做RT-PCR做的出来 做REAL-TIME PCR 就算很纯 也未必出的来
: 实验是一环扣一环的
: 在下虽然没有这里前辈丰富的实验经验及理论背景
: 不过还是私以为实验往往最大的问题不是来自机器
: 而是操作这些实验的人的步骤
: 而且troble shooting
: 本来就是该从自己能解决且最有可能的地方先做起
: 难不成阁下真的有把握换了台仪器结果就一定很漂亮的出来??
: : 前面说到要很纯的样本 罗氏会不知道我们需要的目的吗
: : 卖机器的不会问对方需要什麽吗 就直接卖吗
: 很纯的样本不是问题
: 难到随便拿个ㄚ哩布达的东西跑得出来您会很高兴?
: 假设是抽RNA 纯度当然是越纯越好ㄚ
: 这跟对方需不需要知道您的目的是两码子事
: 您的实验要用到什麽样的仪器
: 本来就是自己该要先做功课 再去和厂商做洽询
: : 这台机器买的人 不是我 以前学校有 但是在养蚊子
: 别一直强调买的人不是您
: 我猜您的实验室 有90%以上买的东西不是您
: 那您的学校还真有钱
: 可惜了那台仪器
: 如果是Roche的lightcycler那台真的不错用
: 操作得当 可为您省下不少宝贵时间
: : 如果说要很纯的样本 罗氏干麻要我们买
: : 他有英文的说明书 但我连看都不想看
: : 之前上面的要我做 我都一直推掉 现在换学姊做
: : (因为有碰过那台机器只有我跟她 机器在她进公司之後买
: : 在我进公司之前买 要是我一定阻止下来 )
: : 我不做是因为我不会做 她们来上课 我学校还没毕业 也都还没进入那家公司
: : 一年做不到两百各检体 不知道为什麽要买那台机器
: 这里不缀诉 上面提过了
: 请您心态要调整一下
我工作不是做实验室 跑现场 你可能前文没看清楚 不缀诉
: : 有本事卖 就要有本事建立环境给人家不是吗
: : 这台机器采购 我还没进公司
: : 真正做的都是底下的 有权购买的人 通常都是给意见 但不是第一线人员
: 还是那句话 请别强调机器买时您还没进公司
: 现在的日本人也会说南京大屠杀时他还没出生ㄚ.....(什麽跟什麽 这是废话!)
我在 我一定挡下来
: : 如果有人可以来台南帮我们做
: : 我们愿意给车马费 而不是像罗氏的人 你应该怎麽怎麽做
: : 对不起 都试了 做不出来
: 您不妨把您试过的条件 过程写清楚
: 说不定有些部分是您没注意到
: 我想板上很多有经验的前辈会不吝给您指教
: 至於想要请人代做 虽然那也不失一个方法
: 不过我只能说..
: 实验还是您自己的 尽可能得靠自己去完成他会有很大的成就感
: 现在有这个版面是让大家线上讨论
: 如果真有那麽好心的人 愿意帮忙人代做实验
: 我想我会很想发给他一张卡........(您真是个大好人ㄚ~~~~~~~)
这各实验跟我一点关系都没有
我完全不想碰这台机器是因为
在动物体内检测出极少量的病毒有意义吗
会致病 我只相信一般的PCR
说难听一点
REAL-TIME PCR 我不认为会赢一般的PCR
拜托人来做是因为
专家都做不出来了 更何况我们
罗氏的小姐来 也不是每各SAMPLE都出的来
还是先跑完RT-PCR才跑REAL-TIME PCR
这有什麽意义
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.123.96.155
※ 编辑: AS1 来自: 122.123.96.155 (02/16 21:42)
※ 编辑: AS1 来自: 122.123.96.155 (02/16 21:51)
1F:推 aggaci:QPCR优点在於可以定量...你ㄧ般PCR要定量可以,你知道多麻 02/16 21:56
2F:→ aggaci:烦吗?说你不懂就你回去查资料还ㄧ直发牢骚...切~ 02/16 21:57
3F:→ AS1:请问我哪里有说要定量 我们只要跑胶有或没有 切 02/16 21:59
4F:推 latte366:可以请您学姐直接来这发问吗? 感觉你是来乱的! 02/16 22:18
5F:→ latte366:又说自己不想学 来抱怨的 您走错版了吧! 02/16 22:19
6F:→ latte366:学习的动机没有 发问的礼节也没有 02/16 22:20
7F:→ latte366:a大的意思事告诉您qPCR的优点 别搞不清楚不同机器的优缺 02/16 22:21
8F:→ latte366:就断言一台机器很烂! 如果您只是来抱怨不做定量干嘛用到 02/16 22:22
9F:→ latte366:qPCR 那您真的走错地方了 麻烦按"<-"左转 谢谢! 02/16 22:24
10F:→ AS1:我只是把我遇到的情形写出来 学习动机没有 02/16 22:35
11F:→ AS1:学愈多 做死的是自己 请问我前几篇哪里没礼节 02/16 22:36
12F:→ AS1:前面就已经说跑胶产物大小不对 一直跟我提定量 要定什麽 02/16 22:37
13F:→ AS1:latte366 你说话也是反讽 别以为别人看不懂 02/16 22:39
14F:推 Proteomics:你请你学姐上来问~ 版上很多人认为你是来乱的! 02/16 22:56
15F:推 a64toto:原po是不是公务员啊?只有公务员才会"分工"这麽仔细... 02/16 22:59
16F:→ a64toto:如果是民间的公司或助理...我是你老板的话一定马上开除你 02/16 23:00
17F:推 a64toto:多做多错..少做少错..那不做就没错啦,何必问那麽多 02/16 23:02
18F:→ a64toto:不是您负责的事情就不要管啦,问那麽多干嘛... 02/16 23:03
19F:→ AS1:因为做不出来 连带也会被拖下水 请问开除的理由是??? 02/16 23:19
20F:→ AS1:公司换总经理 第一年 所以分红三各半月 打破40年 02/16 23:21
21F:→ AS1:总经理说 公司只问你功劳 不问你苦劳 02/16 23:21
22F:推 a64toto:既然会被拖下水,那建议您还是积极一点比较好 02/16 23:22
23F:→ AS1:试八个月 耗材六万 机器130万 没有做出来 02/16 23:22
24F:→ AS1:问题是我跑外面 不是做实验室的工作 02/16 23:23
25F:→ a64toto:千万不要半桶水响叮当啊..哪天机器坏掉说是你用坏的就完了 02/16 23:23
26F:→ AS1:现在是有做出来 她的功劳就最大 所以才会请罗氏专员来 02/16 23:24
27F:→ AS1:问题是罗氏都不来 所以现在改天天打电话去卢经理 02/16 23:25
28F:→ a64toto:一般学校都是要经过认证才能使用的 02/16 23:25
29F:→ AS1:如果只看说明书就做的出来 技术专员 还要请吗 02/16 23:26
30F:→ AS1:我待过两个学校 大学和研究所 屏科和中兴 从来没听过 02/16 23:27
31F:→ AS1:REAL-TIME PCR 拿来做诊断 这就是我超干罗氏的原因 02/16 23:28
32F:→ AS1:如果人有用 那是我孤陋寡闻 那我们是动物用 02/16 23:30
33F:→ AS1:而且诊断是不收钱 是卖饲料的售後服务 02/16 23:30
34F:→ AS1:因为动物生病会赖饲料和疫苗公司 02/16 23:34
35F:→ AS1:会有症状出现 可是RT-PCR或PCR做不出来的吗 02/16 23:35
36F:推 bluecsky:好啦我们都了解你的重点了..罗氏很烂售後很差..花了130万 02/17 09:32
37F:→ bluecsky:结果居然没帮你把实验做出来..130万应该连paper都要帮你 02/17 09:33
38F:→ bluecsky:写好发好..real-time PCR不可信..直接做PCR就好了 02/17 09:33
39F:→ bluecsky:反正这也不是我的事..我是跑野外的..做不出来跟我无关 02/17 09:34
40F:→ bluecsky:他来教我也不想学..反正我就超干罗氏..这不是我的问题 02/17 09:35
41F:→ bluecsky:是罗氏的错..我也不想学..花了130万就应该把paper都给我 02/17 09:35
42F:→ bluecsky:写好直接放到我桌上..反正我也不是来抱怨的 02/17 09:35
43F:→ bluecsky:以上是重点整理 02/17 09:36
请问你哪只眼睛看到我们的检验报告要发PAPER
检验报告反而不能发PAPER
这就跟瘦肉精原理是一样的
你发了只会害死养殖户
所以请你眼睛看清楚
不然给你两千加车资 你来台南做
做出来就两千加车资
做不出来 就付你车资
否则 我比你更会打嘴炮
提供你新KIT
44F:推 lyuching:推楼上XD 原po根本不是来求救 是来发泄的吧 02/17 12:54
45F:推 penguinpeng:哪要po黑特版吗?我也觉得原po的态度实在...唉~~ 02/17 13:07
46F:推 penguinpeng:我想你应该试着跟你学姐一起想办法解决这问题 02/17 13:10
47F:→ penguinpeng:而且如果有症状就表示有感染,有感染就表示应该有病原 02/17 13:11
48F:→ penguinpeng:病原抓不到就应该试试其他工具 02/17 13:13
49F:→ penguinpeng:原始一点也OK,这样你就更能发现它们的机器有甚麽问题 02/17 13:14
就是因为用PT-PCR或一般PCR做的出来
REAL-TIME PCR做不出来(所用的检体来源都一样)
卢她们来解决 又不来
那买要干麻
她们来也未必做的出来 有些样本有出来 有些没出来
可是这些都是用RT-PCR确认是阳性的
50F:→ penguinpeng:在版上抗议人家公司有用吗? 02/17 13:14
51F:推 penguinpeng:我那时做纯化用TFF滤膜用机器做完整性测试也老做不过 02/17 13:18
52F:→ penguinpeng:最後用最原始的方式做确定滤膜有破 02/17 13:19
53F:→ penguinpeng:厂商还不是一直觉得我们新拆的滤膜怎麽可能破 02/17 13:20
54F:→ penguinpeng:其他同事也是跟我一起想办法啊...抱怨没有用的... 02/17 13:21
※ 编辑: AS1 来自: 122.123.96.155 (02/17 13:32)
55F:推 MrCAKE:AS1都说他很会打嘴炮了 板友就别理他了 02/17 14:09
56F:→ MrCAKE:让他一个人打嘴炮打到死吧 02/17 14:10
57F:→ AS1:感谢抬爱 02/17 14:50
58F:推 qqo8855436:bluecsky summy的很棒 故推 02/17 14:56
59F:→ qqo8855436:就算有版友在台南也不会想为了车马费去帮你做 02/17 14:58
60F:→ qqo8855436:经验无价 如果有人做的出来 你凭啥领那份薪水 02/17 14:58
他做的出来 或做不出来 跟我的薪水 一点关系都没有
我反而想把矛头指向罗氏
一台做不出东西的机器 推销他干麻
现在只有两个人上机过
再加其他人 第三人 第四人 第五人 还是做不出东西
更可以 怪罪於罗氏
到底这台机器好在哪
新车都有一年 三年的保固
到四月满一年 DATE =0
比车贵 贵到没人知道怎麽解决
你要说这个课程度滥也可以 六人有四人有国立硕士学位
61F:推 Jaden:帮人出头很简单 帮人解决问题很难 语气上尊重一下热心的前辈 02/17 15:15
62F:→ Jaden:有很难吗? 02/17 15:16
63F:推 soom:请各位板友冷静阿 please 02/17 15:22
※ 编辑: AS1 来自: 122.123.96.155 (02/17 15:58)
64F:推 aggaci:如果你跟洛是他们讲话也是这种口气,他们不甩你我也不觉得 02/17 16:36
65F:→ aggaci:意外,有问题请教於人请虚心、低姿态,即使你是花钱的那方 02/17 16:37
66F:→ aggaci:打错...是罗氏 02/17 16:39
我只打过一通 之後就懒的打了 因为做过一次 不好做
就打给她们问理由 她们就说试什麽 试什麽
赶紧跳开 因为课长说 想办法解决 难解决阿
就赶紧跑现场
另一个学姊打50通以上 我进公司後 来两次
一次约九点 12点才来
一次约九点 九点做到四点多才离开
结论是 你们的来源太杂 所以 REAL-TIME PCR会乱黏
就陷入无止尽的回圈 请问样本太杂
在买之前 她们就应该知道我们要做什麽样本了吧
现在我都不出意见 以免让人说 你出意见 怎麽自己不去做
现在是 一般RT-PCR先转cDNA 再拿出来跑
我提意见不被采纳 就放弃了
cDNA一般都做42度 一小时(我印象中)
这里只做半小时 我就说 要不要改一下
结果得到答案是 以前做的出来 不需要改
所以放弃 缆太多事 薪水又不会增加 做死的是自己
现在只想知道 有人检测 弃RT-PCR 改REAL-TIME PCR
如果一堆人觉得是对的 那买是对的
如果有人检测是以RT-PCR为主 那买是错的
先说样本只能抽完RNA就上机(要做病毒检测)
不可以培养
如果大家相信的是RT-PCR 叫我去帮忙 我直接说不会
如果相信的是REAL-TIME PCR 叫我去帮忙 也一定要找出答案
我们只需要跑胶 看产物有没有
不定序 不定量
想要买其他东西的经费 都花在这台机器上 舍弃其他 换来的是一台
十各月了 WHERE ARE DATE
※ 编辑: AS1 来自: 122.123.96.155 (02/17 17:09)
67F:推 linkme:不定量 当初干麻买? 要不要认赔杀出 问罗氏有无收购2手机器 02/18 00:22
68F:→ linkme:卖给经费不足但知道他用途的实验室阿~ 02/18 00:24
69F:→ linkme:线在你已经在公司了 想办法把那台弄走阿 用传统PCR就好了~ 02/18 00:25
70F:推 albertwang:"REAL-TIME PCR 我不认为会赢一般的PCR" 呵呵 02/18 21:36
71F:推 tsubasawolfy:你到底是哪科系毕业的?看不出来是生物相关的 02/18 21:50
72F:推 niceone:我中兴 一进实验室教授就教我要自己学看原文说明书 02/19 00:01
73F:→ niceone:其实我知道实验遇到问题又尝试很多做不出来心里会很干 02/19 00:03
74F:→ niceone:但是其实看了一系列文章小弟我也看不下去 02/19 00:05
75F:推 niceone:学长要不要平心静气想一个具体的解决方案 02/19 00:09
76F:→ niceone:依您这种态度 我想应该没人会愿意帮您 也无从帮起 02/19 00:11
77F:→ niceone:假如有得罪请多包含 02/19 00:12
78F:推 jbking:可不可以请问你哪间学校毕业的阿 这麽弱 02/20 05:27