作者yumei (爱自己最重要)
看板Biotech
标题[求救] 抽取plasmid遇到的疑问
时间Tue Feb 19 10:47:17 2008
最近对於抽取plasmid感到有点困惑,
我做的是细菌抗药性基因的实验,
之前曾用传统PCI的方法抽细菌DNA,
然後去跑PCR确认我的菌株有该抗药性基因,
因为想要确认该抗药性基因位於plasmid或是chromasol上
所以使用了Genemark牌的plasmid midi kit抽该菌的plasmid
然後再去跑PCR,一样出现阳性PCR产物,
这样我可以确认该基因位於plasmid上吗?
我的疑问是,当使用kit抽取plasmid後,
直接去跑电泳,除了会看到plasmid的band外,
在大约23kb的位置都会出现chromasol fragment,
这个chromasol fragment会不会干扰PCR的结果?
会不会其实我的PCR阳性产物的template是chromasol fragment
而不是plasmid?
我问了一些人,大家都说使用plasmid kit抽的出的plasmid跑PCR
出现阳性产物就代表该基因位於plamid上,可是总觉得哪里怪怪的...
(我曾试用Southern blot想解决这个问题,但好像plasmid太大(40kb左右)
也或许是copy number太少,总之是失败了)
不知道有没有人能给我一些意见~
先谢谢大家了~
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