作者aggaci (情人节ㄧ直被闪)
看板Biotech
标题Re: [求救] 有关大量表达蛋白的问题
时间Mon Feb 25 23:01:48 2008
※ 引述《artery (酸糖果)》之铭言：
: 用E.coil来大量表达蛋白
: 经由超音波破菌
: 分离supernatant及pellet
: 而所表达的蛋白可能位在supernatant 或pellet
: 请问各位高手
: 假设蛋白表达在pellet，想要让蛋白转成表现在supernatant
: 有什麽方法或技巧？
: ps：就我所知就是降低诱导的温度，但是我试过30,28,16度
: 但还是没有成功，不晓得还有什麽该注意的
: 或是其他小小技巧，请各位高手提供妙计
: 谢谢！
1.换host 如Rosetta-gami (DE3)可以帮助双硫键形成，
比较不会形成inclusion body
2.降低IPTG浓度甚至不加
3.菌养在低温(16度)，shaking 慢一点
4.加些许ethanol，可以帮助诱导HSP表现帮助folding
5.fusion GST or MBP or GFP...可以有效帮助蛋白质变soluble protein
以上我都试过，5效果最好
除非不得已，不然别碰refolding
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◆ From: 140.114.100.165
1F：推 tsubasawolfy:原来还有4这个 GST老板是说casebycase 02/25 23:02
2F：→ tsubasawolfy:refolding也试过(我的蛋白)．．DEAD END 02/25 23:04
3F：推 artery:请问一下，ethanol是用多少量？ 02/25 23:17
4F：→ artery:还有我的蛋白後面不能再加其他的东西，因为我要结晶用的 02/25 23:19
5F：→ artery:所以我的蛋白就是後面再加histag而己 02/25 23:20
6F：→ artery:16度我是加0.1mMIPTG，O/N，但还是失败 02/25 23:21
7F：→ artery:所以请问一下你们在做的时候是诱导多久的时间？ 02/25 23:22
8F：推 zytase:加其他东西可以再切掉阿...只是比较麻烦而已~~ 02/26 10:34
9F：推 yuchipeter:换 RIL or RP ? 只能多方嚐试...重组蛋白case by case 02/26 12:10