作者kennygso (..)
看板Biotech
标题Re: [求救] 有关大量表达蛋白的问题
时间Tue Feb 26 14:12:16 2008
※ 引述《aggaci (情人节ㄧ直被闪)》之铭言：
: ※ 引述《artery (酸糖果)》之铭言：
: : 用E.coil来大量表达蛋白
: : 经由超音波破菌
: : 分离supernatant及pellet
: : 而所表达的蛋白可能位在supernatant 或pellet
: : 请问各位高手
: : 假设蛋白表达在pellet，想要让蛋白转成表现在supernatant
: : 有什麽方法或技巧？
: : ps：就我所知就是降低诱导的温度，但是我试过30,28,16度
: : 但还是没有成功，不晓得还有什麽该注意的
: : 或是其他小小技巧，请各位高手提供妙计
: : 谢谢！
: 1.换host 如Rosetta-gami (DE3)可以帮助双硫键形成，
: 比较不会形成inclusion body
: 2.降低IPTG浓度甚至不加
: 3.菌养在低温(16度)，shaking 慢一点
: 4.加些许ethanol，可以帮助诱导HSP表现帮助folding
: 5.fusion GST or MBP or GFP...可以有效帮助蛋白质变soluble protein
: 以上我都试过，5效果最好
: 除非不得已，不然别碰refolding
还有一个方法
可以试试 co-express E.coli Chaperon protein
像是 Gro-ES, Gro-EL
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