※ 引述《simonmiho (Bear)》之铭言： : ※ 引述《McRay (西施就是爱的天使)》之铭言： : : 如题~ : : 使用pET21a + BL21(DE3)系统 NdeI and HindIII这组酵素 : : Without any fusion tag : : 实验室有两个学弟表现他们的蛋白量都蛮大的 : : 但是我这个蛋白在这系统表现量很低，连inclusion body都没有 : : 定序的结果确定是对的 : : 问题一 : : 如果加了His-tag or T7-tag or GST会改善吗? : : 问题二 : : 如果要clone到另一个plasmid 有没有建议使用的plasmid呢? : 没记错的话21a是 T7 promotor....应该是要先确定在该 : host有无表现吧...... 有 Ab 的话就要先试..再去看是不是 : 用His or GST 主要是便利purify and soluble..... : 我觉得先改善induction 的condition为主.. 痾 我最近遇到一个超奇特的问题 就是我以前养细胞破蛋白来跑western 大部分蛋白浓度都是在2~8 micro gram / micro leter 可是我上次抽出来的那个蛋白 我测浓度的时候 竟然高到吓人 我几乎稀释一千倍已经10次了 (意思是我总共稀释了10的30次方倍) 我取 1 micro leter细胞蛋白 加上 999 micro leter的 lysis buffer稀释 就这样连续稀释总共 稀释了10次 也就是原蛋白浓度稀释了 10的30次方倍 请问一下各位大大 我是不是哪里出问题啦 因为我protein assay的 od值 都比我standar最高的还亮 我真是搞不懂是真的他蛋白浓度就是这麽高 还是我lysis的地方出问题呢 --

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