Hi, 有可能是 1. 没有表现 2. 有表现, 那些杂 band 可能是 splicing variants 建议: 1. 先测序一下, 看 gene 是否 in frame 2. 如果序列都对, 在做 transfection 以後, 晚一点再收细胞. 让 基因有充足的时间表现. 3. Transfect 到高表达的细胞株试试, 比如 HEK293T 细胞. Good luck! ※ 引述《anchi35 ( )》之铭言： : 请问各位高手 : 目前在进行flag-tagged protein的实验 : 实验大致如下 : 质体以superfect送入到PC3 cell 养overnight : 将细胞lyse後15000rpm 离心20min 取上清液 : Control组 : PC3 cell lysate only : 实验组 : Flag-tagged protein 1 75kDa (我主要在测试的) : Flag-tagged protein 2 20kDa (实验室学姊的,这组算是用来测试transfection : 是否成功) : 做western : 用的抗体是Sigma Monoclonal ANTI-FLAG M2 monoclone antibody 1:500 : 结果出现一些杂band (control组也有) : protein 2有大量表现 : protein 1则没有 : 可是比较3组 扣除都有出现的杂band : Flag-tagged protein 1那组有多出两条约40-50kDa大小的band : 请问这有可能是protein 1 degrade? : 还是也只是杂band 而我要的protein 1根本不表现 : 如果是根本不表现 请问可能原因为何? : 该如何使它表现? : 谢谢各位的回答及指教 --

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