作者ayinie (诸事不顺啊~~~)
看板Biotech
标题[求救] 抽不到RNA
时间Mon Mar 3 20:26:43 2008
我是从组织抽RNA来测是否有感染某病毒
以前抽RNA一直都没问题
可是这阵子老是抽不到
就是连β-actin都没有
我不知道问题出在哪?
我都是照实验室"祖传"步骤在做
先排除掉DEPC水和tip等器材是否污染的问题
因为实验室其它人在抽也都是用同样的设备同样的DEPC水
可是他们都抽得到
我目前发现一个问题
就是加完isopropanol放置-70度超过20分钟後离心
离心完都会有白白的pellet
学姐说她们做也会有
可是她们的pellet在酒精沉淀後烘乾时就会熔掉了
或者烘乾完加了DEPC水後pellet也会自动溶掉
问题来了
我的pellet根本溶不掉!!
我重做了好几次
有的sample最後总算有抽到
有的sample仍旧没有
我发现pellet有溶掉的最後跑RT-PCR都跑得出来
可是pellet没溶掉的就跑不出东西来了
就是连β-actin都没有
酒精沉淀後我以50度加热到整个eppendorf完全乾掉
但是pellet仍旧没有熔掉
加入DEPC水後以手指敲打
有的pellet总算溶掉
有的还是溶不掉
继续加热一阵子pellet还是溶不掉
奇怪的是我抽RNA也抽了半年有了
之前都没这问题呀
学姐说pellet溶不掉表示那是蛋白
可是前面用trizol和chloroform沉淀蛋白的步骤我都没有做错
离心完吸取上清液也绝不可能吸到蛋白层(因为上清液很多)
我快疯了啦~~~~
我完全不知道问题出在哪
为什麽会有那些溶不掉的pellet?!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.117.178
1F：推 aggaci:应该是酒精dry太久了...抽风dry个5分钟就可以回溶 03/03 20:31
2F：→ ayinie:我还做过烘乾2分钟 照样溶不掉pellet 03/03 21:06
3F：→ ayinie:5分钟我也试过 有的溶得掉有的溶不掉 可是学姐说她曾经 03/03 21:08
4F：→ ayinie:放过30分钟还是很ok 03/03 21:08
5F：推 iamonster:好了 03/03 22:03
6F：推 micocat:酒精风乾时不要完全乾掉 RNA乾掉的话溶解度很差 03/04 02:36
7F：推 bicon:酒精wash後，倒掉酒精(一定倒不乾净)，之後再离心 03/04 13:00
8F：→ bicon:用tip把剩余酒精吸起来，可以吸的很乾净。 03/04 13:01
9F：→ bicon:air dry，5 分钟就乾了。 03/04 13:01
10F：→ bicon:我们家RNA 是会在4度C 回溶 overnight 03/04 13:02
11F：推 meiosisLin:我的作法，酒精抽掉，air dry就好.......不太需要抽气 03/04 22:39
12F：→ meiosisLin:烘乾，然後加水在室温或是55度回溶都OK 03/04 22:40
13F：推 zoom8080:回溶记得用pipette打个十来下 会溶的比较好喔~~ 03/04 22:43