可以用AKTAprime先跑个gradient 就能找出每种protein的elution conc. 不同protein的binding能力不同 我做过的protein从65 mM ~ 150 mM 都有 所以一定要先测过 不过其实这样也不一定能拿到很纯的protein 如果你的protein binding 能力低於 non-specific binding 那就很抱歉啦 换种方法吧 ※ 引述《ayinie (心力交瘁........)》之铭言： : 我的蛋白是接在pET28b带有6-His tag : 使用Ni-NTA纯化蛋白 : 之前使用Lysis 10mM/10ml、Wash 20mM/20ml、Elution 250mM/3ml : 结果每次跑胶染comassie blue出来都会有两条bands : 一条在44kD是我的目标蛋白 : 一条在17kD不知是啥鬼 : 这两条band染色结果是差不多粗 : 可是做Western以Anti-His去认的话可发现17kD那条band非常非常地淡 : 怎麽看都不太可能是我的蛋白断掉的片段 : 想请教的是... : 会不会是因为我在纯化的过程imidazole浓度跳太多(20mM→250mM)？ : 我现在想试试看改成10mM、20mM、50mM、100mM、150mM、200mM、250mM : 那麽50mM、100mM、150mM、200mM这些的体积分别要加多少比较好？ : 谢谢！ --

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