作者Janeliuu (rr)
看板Biotech
标题Re: [求救] 蛋白纯化imidazole的浓度
时间Sun Mar 9 13:40:12 2008
Hi,
1. Add 0.5% triton X-100 into the binding buffer. It reduces the
non-specific binding to some degree.
2. Try to pass the eluate through various ion-exchange chromatography
columns (e.g. DEAE column, Q column, and see what happens.
3. Add different tags to the protein (flag, myc, etc) and use antibodies
to purify the protein.
Good luck!
※ 引述《ayinie (心力交瘁........)》之铭言：
: 我的蛋白是接在pET28b带有6-His tag
: 使用Ni-NTA纯化蛋白
: 之前使用Lysis 10mM/10ml、Wash 20mM/20ml、Elution 250mM/3ml
: 结果每次跑胶染comassie blue出来都会有两条bands
: 一条在44kD是我的目标蛋白
: 一条在17kD不知是啥鬼
: 这两条band染色结果是差不多粗
: 可是做Western以Anti-His去认的话可发现17kD那条band非常非常地淡
: 怎麽看都不太可能是我的蛋白断掉的片段
: 想请教的是...
: 会不会是因为我在纯化的过程imidazole浓度跳太多(20mM→250mM)？
: 我现在想试试看改成10mM、20mM、50mM、100mM、150mM、200mM、250mM
: 那麽50mM、100mM、150mM、200mM这些的体积分别要加多少比较好？
: 谢谢！
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