作者mournermind (阿蒙)
看板Biotech
标题想请问大家这样western的结果代表怎样情况
时间Tue Mar 11 22:01:23 2008
之前我将一个inclusion body(vector:pET30a host cell:E.coli Novablue(DE3) )
用Urea(6M) denature後去给浊水溪作多株抗体 之後做western时发现:
control = pET30a/Novablue(DE3) :0.5mM induce 5hr 在his tag的地方有detect到
(这我觉得OK)
但是我当初表现来纯化的clone: pET30a+insert//Novablue(DE3) :0.5mM induce 5hr
除了在major band外还有一堆像是smear的band(上下都有)
我自己是认为这些band不是因为抗体不购专一,而是因为蛋白表现得太夸张,所以
才会有这样恐怖的景象~因为如果说是因为当初我纯化给浊水溪作抗体的蛋白不够纯
包含了host cell本身的蛋白,那我的control也应该要出现一堆杂band才对
可是我的control是没有杂band的....
浊水溪的技术大哥是跟我说...有可能是我当初纯化的那个蛋白跟MP有interaction
所以才会这样......不知道有没有人可以给我一些想法呢?
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