小的意见是...可能得麻烦你做几个步骤确认一下: 第一:这次实验的方法步骤都跟之前可以定序出来的都一样吗? 还是有不同的地方? 第二:在你的实验叙述中, 你GEL上有BAND表示你PCR没问题, 但你定序不出来, 表示... 可能在你GEL EXTRACTION的部份是不是有问题? 因为你所谓的全军覆没...是指没 东西? 还是杂讯很多呢? 如果没东西, 表示你送的那些GEL EXTRACTION後的产物也 许都流失掉了, 所以, 造在定序公司那边, 他要再P一次会P不出东西~也就会没有 讯号产生了! 那如果杂讯很多, 这就比较麻烦, 原因可能就很多了, 定序公司的 能力也是一个问题, 还有你在GEL EXTRACTION时纯化的部份也有可能出问题, 因此 我想~你可以再做一次实验, 然後从你原本GEL EXTRACTION产物再P一次(这就是自己 去做确认, 是不是真的可以P出东西来)然後再跑GEL, 如果, 跑出来的结果是有你 要的BAND 那~恭喜, 至少可以知道你GEL EXTRACTION KIT应该没问题, 如果这样~ 理论上定序应该也不至於啥都没有!! 然後, 就可以跟定序公司的业务讨论, 为啥 会这样(杂讯大, 也可以问一下定序公司, 是啥原因造成的Buffer? 纯度? or???) 我想~这样你应该可以比较清楚问题发生在哪~~~ 祝你顺利吧!! ※ 引述《rvnkhlnomgtl (或许天堂也常日落)》之铭言： : 最近忙着定序的工作 : 我们实验室的习惯是,先PCR後跑电泳,再切下band送定序 : 但不知道为什麽,电泳图明明显示清楚的条带,我也保证切胶的过程与保存没有问题 : 但源资(定序公司)竟然送来的资料是全军覆没....让我没法接受 : 打电话去公司说请我再重送一下...但大家也都知道taq的消耗量很大 : (总共有39管) : 实在很不好意思拿着定序服务失败的收据单给老板签名啊!!!! : 所以想请问大家...电泳图能拍得出来并切下该条带的胶送定序没法定序的情况是 : 有可能发生的吗??? : 另外想请问大家都是给哪一家定序的呢? : 明欣的风评如何呢?如果可以也顺便给我报个价~~~谢谢~ --

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