作者bbiioo (梅子)
看板Biotech
标题[求救] 请问DIG High Prime DNA Labeling and Detection Kit的使用
时间Wed Mar 19 17:13:59 2008
初次使用DIG High Prime DNA Labeling and Detection starter Kit这套kit
不知板上有没有人用过这一套southern blotting的kit
想请教一些问题
1.Probe labeling的制作，label後的probe是不是一定要马上开始进行hybridization??
没用的可以保存多久呀??
2.进行transfer时，如何使我的模板dna变性??
我的DNA是经由酵素切割後的Cchromosome DNA@@
後来参考一些资料後的作法
1.Gel 用dd H2O洗过
2.Wash gel in 0.25 M HCl 、30分
3.倒掉HCl、以dd H2O rinse
4.Wash gel in (0.5 M NaOH, 1.5 M NaCl) 、20分
使DNA形成单股
5.倒掉液体、以dd H2O rinse
6.再重覆一次4-5
7.Wash gel in (0.5 M Tris pH 7.0, 3.0 M NaCl) 、20分
8.倒掉液体、以dd H2O rinse
9.再重覆一次7-8
接着就用0.4N NaOH作 transfer.....为何用NaOH...老板说的所以就先试试罗
3.pre- hybridization後呀~是否要将多余的Dig Easy Hyb洗掉才能进行接下来的步骤??
要洗~那要用什麽洗呢??因为他说明书没写到~所以还蛮疑问的!!
以上问题~感谢大家花时间看~
麻烦帮我解答一下~
感激不尽唷
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.38.110
1F：→ milkpa:Southern处理胶的三个溶液其中有一个就是变性用的 03/19 21:59
2F：→ bbiioo:是transfer後吗? 03/20 08:24
※ 编辑: bbiioo 来自: 140.130.38.110 (03/20 23:42)
3F：→ bbiioo:为何我修完文别人回应的文章也不见了@@我还要看说~怎会这样 03/20 23:43