谢谢大家推文回应 下面是回应推文的问题 我们实验室只有我一个人做 很多东西我都不太懂 请教一下前辈 1. 我不知道怎麽作melting curve 稍微看了一下 好像是在amplify之後 请问软件上面是否就有内建的程式可以跑 我用的是SDS2.0 2. 我的primer是别人设计的 GCGTTCGGCACGGTGTATAA GGCTTTCGGAGATGTTGCTTC 昨天用beacon designer run了一下 发现是poor =而且有很多dimer 我发现dimer有一个量化的数delta G 一般介於0到-2 之间 如果没有dimer的话是0 我还不太知道那个值有什麽意义 我准备定一对没有dimer的primer试试看 3. 50 bp的确是比较模糊的一条band 但还是满亮的 我准备把primer 降低一倍再试一次 (原本是10uM primer 取1 ul mixture in 25ul total) 4. 我用的机器是ABI7900 谢谢大家 ※ 引述《apoptosis (good job)》之铭言： : 最近作real time遇到困难 : 我的问题是这样 : 1.primer + mixture 也有大约20~30 cycle, 我怀疑污染 就去跑胶 : run gel发现有加cDNA的有两条BAND, : 一条在100bp 是我的产物 另一条在约50bp 我怀疑是primer dimer. : 如果不加cDNA 就没有100bp那条 只有50bp : 现在不知道要怎办 只能redesign primer吗? : 如下图 : M cDNA+primer primer only : 一 : 一 : 一 : 一 : 一 : 一 一 : 一 一 : 2.我的variation非常大 大概会有3~5个cycle(同一个sample) : 不知道是不是就是primer dimer造成的. : 现在一头雾水 请教大家 谢谢 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 76.182.57.0 ※ 编辑: apoptosis 来自: 76.182.57.0 (03/20 11:50)