作者csmceddie (eddie)
看板Biotech
标题Re: [求救] 请问DIG High Prime DNA Labeling and …
时间Thu Mar 20 20:22:19 2008
※ 引述《bbiioo (梅子)》之铭言：
: 初次使用DIG High Prime DNA Labeling and Detection starter Kit这套kit
: 不知板上有没有人用过这一套southern blotting的kit
: 想请教一些问题
: 1.Probe labeling的制作，label後的probe是不是一定要马上开始进行hybridization??
: 没用的可以保存多久呀??
可以保存在-20度
可以一直reuse到probe没了为止
: 2.进行transfer时，如何使我的模板dna变性??
: 我的DNA是经由酵素切割後的Cchromosome DNA@@
: 有人建议跟我说~是在transfer buffer中加NaOH，不知道这样行不行??
denaturating buffer: 0.5N NaOH, 1.5M NaCL
有人直接用这个buffer做transfer
不过做DIG是不建议这样做
所以会再用neutralizing buffer中和
之後用SSC做transfer
: 3.pre- hybridization後呀~是否要将多余的Dig Easy Hyb洗掉才能进行接下来的步骤??
: 要洗~那要用什麽洗呢??因为他说明书没写到~所以还蛮疑问的!!
不用洗
probe也是加在这里面
: 以上问题~感谢大家花时间看~
: 麻烦帮我解答一下~
: 感激不尽唷
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.55
1F：推 Istyle:为什麽不建议用NaOH/NaCl做transfer阿？ 03/20 21:15
2F：→ Istyle:最後transfer完之後不是可以在用2XSSC wash然後cross-link? 03/20 21:16
3F：→ csmceddie:效果比较差 DIG system如果要做single copy gene 03/20 21:19
4F：→ csmceddie:要用SSC transfer才做的出来 03/20 21:22
5F：→ bbiioo:老板建议用0.4N NaOH....先做看看罗~~不好的话再改 03/20 23:45