作者puec2 (^^y)
看板Biotech
标题Re: [求救] 有关cloning的问题
时间Thu Mar 20 20:59:31 2008
※ 引述《kvw (Je t'aime)》之铭言：
: 最近在做cloning
: 所要insert进去的片段大概是1700 bp
: 所使用的是p-GEMT easy vector
: 前面都很顺利
: 後来挑了white colony
: 抽plasmid後 用PCR做confirm(老板说这样比较省钱)
: 结果出来 完全没有insert
: 初步排除是X-Gal出问题
: 因为有蓝有白还蛮多的
: 而其他inser进去的片段是400 bp的都成功
: 唯独这个大片段的 挑了快20个white colony都没有insert进去
: 有没有人遇到这样的情形 拜托帮帮忙
请问你的colony有没有大颗小颗不均匀的情形？
你可以试试把plate的抗生素浓度降低(e.g. 25 amp)，放在室温培养，2~3天，或许..
挑小颗的colony就可以拿到你要的construct了。
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◆ From: 211.76.175.170
1F：推 Locutus:请问这样做的理由是什麽? 因为我也有类似的问题 03/21 00:46