作者aaada (rex)
看板Biotech
标题Re: [讨论] cloning
时间Thu Mar 20 23:57:57 2008
※ 引述《lblackpig (小黑猪)》之铭言：
: 我使用PCR的方式将目标基因p出来，将PCR product由gel纯化出来，再将其与T voector
: 进行ligate，并进行transform。结果可以长出蛮多的colony。接下来想要将其clone到
: pEGFP-N1，使用enzyme将T vector上的gene切下并elute出来，同时也使用相同的enzyme
: 切pEGFP-N1(不过可能两个切点太近，只有约4-50 bp，所以gel上并看不出被切下来的
: band，也不太确定有没有切开），将两者放在一起liagte，之後进行transform。但是
: 长出来的colony非常少，或者完全没有，不管我的基因是600bp或1600bp，都是这样，各
: 位有没有任何看法？为何这样的liagtion似乎好像效率不高？
有几各可能 你参考看看
先决条件是 vector and insert处理都没有问题
1.抗生素是否使用正确, pEGFP 记得是抗 kanamycin,不是常使用的Amp
2.competent cell efficiency太低, 多挑几各或许可以挑到,
或是换好一点的 competent cell
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