作者cytospin (无心)
看板Biotech
标题[求救] Co-IP
时间Sun Mar 23 22:09:37 2008
请问一下比较好的Co-IP lysis buffer使用什麽比较好
现在我就是用普通的lysis buffer (Tris, NaCl, EDTA, 10%glyceral, 还有一堆inhibitor)
可是做出来效果不是很好
想说会部会我的lysis buffer太强了 (我似乎有看到有人用tritonX-100做)
把pt-pt interaction也都打破了
我的做法如下:
1. 3x 10^7 cells lyzed in 500 ul lysis buffer, 4C, rock for 45 min
2. Spin down 20 min
3. sup preclean with Trueblot anti Rabbit beads 30 min
4. Add 5 ug of primary Ab, 4C rock O/N
5. add 50 ul beads 1hr, rock , 4C
6. wash twice,
7. add 2 X loading buffer , heat 10 min
8. spindown, loading
hmm.....大概就是这个样子
请问Co-IP达人
有没有比较好的建议??
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 75.185.92.118
1F：推 blence:lysis buffer没有detergent，没外力应该很难破吧？ 03/23 22:36
2F：推 lblackpig:如果目标是cytosolic protein，用TE再用sonicate 03/23 23:35