作者xyz0319 (你今天yanzi了吗)
看板Biotech
标题[求救] western 转印的问题
时间Mon Mar 24 22:40:17 2008
各位晚安
我最近在做western,但是常常在transfer这一步有问题
每次都会跑过头(PVDF上的某些地方变的有点透明),然後看不到MARKER
我试过几个参数
125mA跑overnight(放4度C冰箱)
80mA跑overnight(放4度C冰箱)
250mA跑两小时(放室温,但是周围有用冰砖围着)
而且在转印槽里面,都有放专用的冰盒
但是每次都会有一样的问题,也不知道是哪边出问题
今天有人建议说用120V跑30分钟试试看
不知道版上的各位有什麽建议呢?
谢谢 感激不尽
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.21.135
1F：推 LIAR:请问PVDF跑过头会透明啊？ 03/24 22:53
2F：→ LIAR:另外不是要看面积换算电流吗？我们是1.5mA/cm2 03/24 22:53
3F：推 bluecsky:是可以算啦不过一般都会偷懒的XD.. 03/25 03:31
4F：→ bluecsky:你的参数设定都跑太久了啦..overnight就用10V就够了 03/25 03:31
5F：→ bluecsky:250mA顶多一个小时左右..当然跟你目标的protein大小有关 03/25 03:32
6F：推 silverberry:我们家 6*9 cm2 的 29 mA 4 度跑 overnight 03/25 04:44
7F：→ silverberry:400 mA 就跑 1 小时~ SDS-PAGE 12.5% 上的 marker 03/25 04:44
8F：→ silverberry:除了有的时候最大的还会有点残留外 几乎都会留在膜上~ 03/25 04:46
9F：→ silverberry:另外我们家是 BIO-RAD 的~~ 给你参考罗^^ 03/25 04:47
10F：→ xyz0319:非常非常感谢楼上各位大大...我们家也是BIO-RAD的^^ 03/25 10:00
11F：推 cytospin:请问你放PVDF membrane之前有用methanol浸湿吗? 03/25 11:17
12F：→ cytospin:看你那症状还挺像我们labmate最近出的状况... 03/25 11:19
13F：→ xyz0319:有耶~methanol大概20秒..然後mili-q water两分钟..然後在 03/25 11:18
14F：→ xyz0319:transfer buffer中balence五分钟(是参照hand book的) 03/25 11:21