作者LIAR (堕天使)
看板Biotech
标题[讨论] SDS-PAGE用的LAEMMLI buffer成份过浓....
时间Mon Mar 24 22:51:22 2008
我从暑期课、GOOGLE、其他实验室protocal粽何western的配方,其中Laemmli sample
buffer中固定有这几项:
SDS 带负电、unfolding
2-ME 解S-S
glycerol 方便sample下沉
bromophenol blue 看跑的进度
tris-HCL 稳定pH
所以看起来glycerol和dye比例应该可以变动大一些,但我找到2X、4X、6X的配方後
回推到1X时所有的浓度,发现除了glycerol=10%、2-ME=5%比较固定,反而其他的
配方大家都不一样。
我之所以注意到是因为当我要把2X直接换算到6X,却发生glycerol占掉60%,结果
SDS的12%没有足够的水可溶。所以我推测6X应该会把一些东西的浓度调降。
不过要降也不能降太低,不然我猜会发生unfolding不完全、S-S没解完,pH跑掉的
现象,所以我想请问一下各别成份的最低作用浓度应该要多少呢?
别的实验室认为1X工作浓度SDS 1%就够了,tris则是20mM~50mM,请问这样合理吗?
那其他配方又如何呢?
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太初有道,道与耶和华同在,道就是耶和华。这道太初与耶和华同在。
万物乃藉祂所造,凡被造的没有一样不是藉着祂所造的。生命在祂里头,
这生命就是人的光。光照在黑暗里,黑暗却不接受光。
吾辈乃生於黑暗,行於黑暗。因神之指引,行向光明;又因撒旦诱惑,回归黑暗。
我不断地徘徊於光明与黑暗之间,从被造之日至今,又自今直到那审判之日的来临。
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1F:→ cytospin:因为我有个labmate搞了两次transfer失败竟然是没有prewet 03/25 11:18