作者huangsw (Orz)
看板Biotech
标题Re: [求救] real time PCR variation 很大(同sample)
时间Tue Mar 25 22:58:51 2008
前面吃光光
1F：→ huangsw:补一个 ABI机器似乎可以使用RNaseP进行校正 03/25 01:17
2F：推 Popopon:因为是公用仪器，所以维修的是谁其实不清楚，只知道有人负 03/25 08:47
3F：→ Popopon:责管理。 03/25 08:48
4F：→ Popopon:我比较有兴趣是Mix的问题，因为我们体积是10ul的，如果再 03/25 08:49
5F：→ Popopon:mix很怕反而因为tip残留变更不准，我们只有用96well离心机 03/25 08:50
6F：→ Popopon:并没有另外做mix的动作，想请问你们怎麽mix的 谢谢 03/25 08:51
7F：推 qqo8855436:master mix泡好要spindown再分装 03/25 19:03
简略的叙述一下
我会先加水
然後混入F primer 然後 pipeting 数次
混入R primer 然後一样 pipeting 数次
最後混mastermix 他比较浓稠 所以更要注意慢吸慢放
这样就是我的mastermix制备
至於q大说得spindown.... 因为我都是贴着液面加
在加入前 也都会pipetin数次.... 所以我就省略了 然後进行分装 orz～
我是用384孔盘 5ul/reaction 检体做triplicate 用到现在还ok
上机前会用离心机整盘spindown一下
但是没有spindown的效果 跟有spindown 从实验结果看不出差异
有整盘spindown一下 比较心安(?)
tip有低残的阿 可以多问问几间
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修文 补了上机前spindown的部分
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※ 编辑: huangsw 来自: 203.73.207.171 (03/25 23:01)
8F：推 qqo8855436:因为我没有每加一个就pipeting所以最後直接spindown!! 03/26 18:04
9F：→ huangsw:XD 效果一样就好 03/27 00:09