作者pop6234 (表面的和平)
看板Biotech
标题[求救] cloning 失败好多次 就是接不起来...
时间Thu Mar 27 03:28:26 2008
我的insert大概是1400bp
vector是pAS2-1 (Clontech)
切单刀
所以有用CIP处理vector
切完酵素之後跑电泳切胶
gel extraction之後
再做ligation
16度C overnight
因为我的insert量很少
所以我insert跟vector的ligation比例用
3:1 3:0.5 5:0.5
还有做vector的(切完酵素之後再ligation)
可是
transform之後
盘上一颗也没长
vector only的也没长...
本来老板觉得是我技术不好
transform有问题
所以我上次有多做一组没有切过酵素的vector
那次就那盘没切接过的有长而已
如果说是我ligation的比例不好之类的
我都可以接受
可是
连vector only的都没长
让我真的不知道该怎麽改我的实验
想请教大家连vector only 的都没长有可能是什麽原因?
buffer之类的都是公用的
别人的clone都有长
就我的长不出来...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.178.29
1F：推 oplz:那就先请别人做吧...这样最有效..也可知道问题在人还是在物上 03/27 04:32
2F：推 J0HAN:你用哪个酵素切的啊？ 03/27 11:37
3F：推 ad1980:vector 有 CIP 的话，vector only 不是本来就不会长嘛？ 04/06 22:33