作者xyz0319 (你今天yanzi了吗)
看板Biotech
标题[求救] real time PCR 跑不出来
时间Mon Apr 7 14:23:53 2008
板上各位大大好
我最近在跑real time pcr,但是一直卡在primer的问题
我是用DNA star跟NTI两个软体交叉确认primer的优劣度
但是再跑real time时,同一个sample不是跑不出来,就是Ct值差很多(我做三重复)
而在Tm设定方面,我按照软体建议的Tm值以及合primer公司给的建议值,各做一次
但是一直有前述的问题...而control组的都有跑出来
搞得目前我不知道该从哪边去着手了@@
有哪位大大可以给我一点建议吗? 谢谢
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.21.135
1F：推 qqo8855436:sample 品质有在水准上吗??? 04/07 18:01
2F：→ xyz0319:没有非常好...但是OK,只是浓度没有很高,但是其他PRIMER都 04/07 22:54
3F：→ xyz0319:有跑出来...我有怀疑过会不会是浓度太低 04/07 22:55
4F：推 qqo8855436:你先用一般machine 有run出来吗?? 04/07 23:15
5F：→ qqo8855436:没有非常好是怎样?? 你是RNA or DNA?? 04/07 23:15
6F：→ qqo8855436:您得机型是?? 04/07 23:16
7F：推 jsi:最近我也遇到类似情况 後来是用Biorad机器进行gradient 04/09 22:45
8F：→ jsi:annealing temp去找寻可以作用的温度 发现适用温度比预期少了 04/09 22:46
9F：→ jsi:8度 或许你可以参考看看 04/09 22:47
10F：→ xyz0319:嗯嗯 谢谢^^ 04/10 10:07