作者sweetE (sweetE)
看板Biotech
标题[求救]protein protein interaction
时间Sat Apr 12 19:20:10 2008
请问各位大大
有哪些方式可以证明A蛋白与B蛋白的association
是属於"DIRECT" interaction?
目前我所知道的方法有点类似FRET
overexpression接上不同萤光蛋白的A B蛋白(A的激发光被B吸收)
当他们是direct association时 由於距离很近 所以可以引发FRET效应
发出的萤光 major会是B蛋白的萤光(A蛋白发出的萤光非常微弱)
我想除了这个以外 是否还有其他的方法可以证明
谢谢大家回答~^^
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.115.102.190
1F：推 jjogp:pull-down 04/12 20:44
2F：推 simonmiho:Yeast two hybrid..or IP(有可能会co-precipitative).. 04/12 20:46
3F：→ sweetE:IP的话似乎无法证明是"DIRECT"~ 可能中间还有别的蛋白介入 04/12 21:01
4F：推 aggaci:分别纯化recombinant protein=>IP 04/12 21:11
5F：推 liuse:in vitro pull down配合找出interaction domain 04/13 00:29
6F：→ liuse:Y2H是非常好的direct evidence 04/13 00:29
7F：推 laiojoyce:GST pull down +TNT 04/13 15:07
8F：推 olang:AUC跑沉降系数应该可以看出来,不过全台湾好像没几台的样子! 04/13 17:22
9F：推 skylawer:即便有AUC 全台湾也没几人会用AUC做interaction的实验 04/13 18:36
10F：→ skylawer:但 SPR 这仪器也是很难搞 能不用测ka kd 就不要测 04/13 18:38
11F：推 leoblack:IP得做到2种Ab互抓都可以抓到对方(A IP B+B IP A)才算是 04/14 02:20