作者owl628 (owl628)
看板Biotech
标题[求救] PCR的问题
时间Wed Apr 16 00:27:46 2008
我的primer每条都是80b.p
只有每条的前面20b.p会去和template(plasmid)annealing
其余的部分是用来做同源互换的
我用的酵素是pfu
但是我跑胶後怎样都看不到我要的片段(约1900b.p)
template 1
10Xbuffer 2.5 94度 5分
2mMdNTP 2.5 94度 30秒]
primer-F 0.5 55度 30秒] 30cycle
primer-R 0.5 72度 2分 ]
pfu 0.3 72度 7分
d2H2O 17.7 4度 无限
--------------------
25ul
以上是我的条件,请问有哪边可以改进的,谢谢^^
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 122.118.2.135
1F：推 afraiddog:annealing temp.再降点 或加5%的DMSO试试 04/16 02:27
2F：推 elgase:很好奇你primer的Tm value.. 04/16 12:11
3F：→ owl628:合成的公司算的是70几,但我并不是整段primer都会annealing 04/16 13:08
4F：→ owl628:所以Tm值是我另外算的 04/16 13:09
5F：推 albertwang:先用taq试好条件再用pfu吧然後你东西都没浓度只有体积 04/16 14:39
6F：→ albertwang:这样也不知道你加多少 04/16 14:41