作者rvnkhlnomgtl (或许天堂也常日落)
看板Biotech
标题[讨论] 定序时条带太淡了怎麽调整?
时间Wed Apr 16 15:53:24 2008
我的实验室是专门做植物萃取的实验
最近在定序上发生了一些小问题
我实验的物种大致有三种---海茄苳,银叶及水芫花(均为滨海树种)
海茄苳的定序一直都很好没有问题
但头痛的是银叶和水芫花的定序条带都很淡
送定序时常因讯号太弱而失败
首先,我可以确定pcr程式是没有问题的,primer、dntp、taq和buffer都没有问题
(因为海茄苳都定的出来!银叶和水芫花也偶尔定的出来~)
taq 0.4
buffer 5
dntp 2
primer 2
primer 2
水 36.6
tdna 2
total 50
请问我应该怎麽调整呢???
麻烦大家提出些意见参考~~谢谢!
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遗憾提醒我们曾经幸福的可能
但 我们毕竟是错过了!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 211.75.55.226
1F：→ rvnkhlnomgtl:ps产物50ul中我会load 10ul去跑胶,有BAND我才送定序! 04/16 15:54
2F：推 dankai:PCR产物最好先经过clean up再送定序!! 04/16 16:01
3F：→ dankai:你的10ul band多亮阿~~~如果淡淡的!那产物浓度真的不高~ 04/16 16:02
4F：→ rvnkhlnomgtl:有时候淡有时候很亮..... 04/16 17:33
5F：→ h3250sam:做完PCR反应,clean up 回溶25ul,提高浓度 04/16 18:23
6F：→ h3250sam:load 3ul check的band普通亮,这样定序通常都ok 04/16 18:24
7F：→ h3250sam:暴力一点也可以做两三管Clean up成1管,但如果专一性不够 04/16 18:27
8F：→ h3250sam:这时候杂band的浓度也一起被提高了... 04/16 18:29
9F：推 h3250sam:dNTP 2mM可以加到5ul做看看 04/16 18:31
10F：推 alaric:EtBr染色步骤有固定? 04/16 19:15
11F：推 alaric:tDNA 1ul或更少0.5ul 04/16 19:19