作者iiidns (最近真忙碌)
看板Biotech
标题Re: [求救]冷冻切片及一些免疫组织染色相关
时间Thu Apr 17 16:59:42 2008
※ 引述《aerogel (俏)》之铭言：
: 想请问板上的版友
: 小弟是做冷冻切片 切完sample後 会先把片子放在-20度冰箱
: 隔天做染色 染色前 我会先让片子降至室温 浸入Xylene 再以酒精覆水(100%->50%)
: 接着就是我的染色了 染色後 会发现我的支架会脱落 不是全部 不过也脱落不少
: (我是将支架植入肌肉层中 所以取出後 支架会被fibrous tissue包覆住)
: 所以染色後 外围的tissue可以被染出来 不过中间的支架会有部份被洗掉
: 请问有啥办法可以尽量避免我的sample被洗掉吗?
: 另外... 想请问一下
: 做免疫组织染色时 会用一种溶液做Blocking 请问Blocking是要做啥的呢?
: 麻烦解答了 感激不尽
我简单说我习惯性染冷冻切片的方式
将sample 回温,约30min左右即可 sample以PBS wash 三次,每次约10min
sample以1%h2o2(in PBS)反应1hr (如果你做萤光染色 就不用此步骤啦)
一抗 (依比例加在含有 blocking serum 的 0.1% Triton X-100 in PBS)
(当然也有人在primary Ab 反应前先做 Triton X-100的反应 1 hr)
反应时间 自行调整
wash 然後再 做 ABC....最後DAB呈色
然後就
接着封片的步骤 先以低浓度酒精脱水 再换置成 100% EtOH 然後 Xylene三次
再用便宜又大碗的阿拉伯胶封片.....
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.15.163.64
1F：推 aerogel:不好意思 可以问一下 那个ABC跟DAB作用是啥吗？ 04/17 22:17
2F：→ iiidns:忽然觉得 你上网google一下 顺便了解免疫染色吧 04/18 09:16
3F：→ iiidns:或是像是前面有板友说的 网路上有很多online protocol 04/18 09:17