作者lail (逃避不是办法阿)
看板Biotech
标题[求救] 关於western blotting时观测phospho protein的问题
时间Sun Apr 20 02:26:35 2008
前面看到有板有在推文中提到
western要辨认磷酸化蛋白质时
比较不建议用脱脂牛奶blocking
建议用BSA blocking
刚好最近我也在看不同的磷酸化蛋白质
其中我观察的p-JNK讯号非常弱
虽然我要比较的差异一直存在
但是整体而言讯号弱到我需要一抗二抗浓度加强
二抗作用时间也需要加长
这样的现象会是因为我用脱脂牛奶blocking有关吗?
我若改用BSA blocking会改善吗?
另外,使用的BSA是用哪种溶剂泡呢(1X TBS? TBST?)
谢谢^^
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 218.165.87.227
1F：推 tsubasawolfy:我用过的都建议TBST 还有用BSA blocking时间要加长 04/20 09:54
2F：→ tsubasawolfy:加长是因为BSA贴附能力没牛奶好(trouble shooting写) 04/20 09:56
3F：→ tsubasawolfy:实际上尝试过RT 1hr.2hr.3hr 4度O/N...RT2hr後效果 04/20 09:57
4F：→ tsubasawolfy:看起来都一样 (不过这也要看你Ab去抓条件￣▽￣||) 04/20 09:58
5F：推 blence:我用过invitrogen的phosphoprotein staining染这些BSA,更是 04/22 08:51
6F：→ blence:充满磷酸化,所以casein被磷酸化而不适用的理由不见的成立 04/22 08:54
7F：→ blence:我觉得用改变non-fat的condition比换BSA来得有效 04/22 08:57
8F：推 C5566S:my sugestion is TBS-T 0.1% 04/22 16:11