作者ruthwu (Ruth)
看板Biotech
标题[求救] flow的一些小撇步!!
时间Thu Apr 24 14:49:06 2008
欲用flow来看细胞的apoptosis
目前是用AnnexinV-PE & 7AAD进行双染 (BD的apoptosis kit)
有些部分想请问一下:
1.收细胞前的wash,到底该用冰的PBS还是室温的??
2.直接冲下??还是以EDTA冲下??
3.resuspend cells in 1x binding buffer(是冰的还是室温呢??)
在实验中,control cell(without treatment)进行单染setting时
发现Annexin positive细胞占了50-60%
同时7AAD positive细胞大约才20%
感觉是Annexin signal超强
(1*10^5 cells/100ul+3ul dye)
请教各位有经验的大大,给予指点迷津吧!!
感激不尽!!
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