作者crazyrange (热血羽球)
看板Biotech
标题[求救] 关於real-time PCR的问题
时间Thu Apr 24 18:07:04 2008
我在萃取RNA之後 没有用DNase
结果我在测量RNA量的时候 我也同时去测量DNA的量
的确也侦测到了DNA的量 而且还不低
我想请问一下
在我抽取的RNA中还有DNA的话
对於我接下来要做的RT会有很大的影响吗?
我是这样想的
RNA是单股 DNA是双股
可是在跑RT的时候 加入的过程中DNA会分解成单股
而加入的primer是random primer
这样的话在做RT的时候 DNA是不是也会被反转录?
那如果在萃取完RNA後加入DNase去反应
是否之後在测量RNA浓度的时候就会测不到DNA的存在?
在RT之後的cDNA需要测cDNA浓度吗?
还是说因为在跑RT之前的RNA就已经是固定量(ug)
所以RT出来的cDNA可以不用测 不同sample可以直接用同量(ul)的template
去跑real-time PCR?
整个疑惑
--
一个动物实验背景现在要做分生的的研究助理
Western blot算分生?
为什麽觉得没碰过DNA RNA cloning就不算做分生?
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.120.7.114
1F：推 qqo8855436:我要trizol抽 没加DNase 跑qPCR-----OK 04/24 18:29
2F：→ qqo8855436:取固定的rna翻成cDNA 再取固定体积RUN即可罗 04/24 18:30
3F：推 allergy1115:恩要怎麽避掉污染问题呀?? 04/24 19:08
4F：推 andy731:你所说的测是?分光法吗...那个是在测ATGC的喔~ 04/24 19:10
5F：→ andy731:我建议~加DNase会比较好... 04/24 19:12
6F：→ crazyrange:我是用NanoDrop测的ND-1000 04/24 19:14
7F：推 andy731:俗称 白色便当盒是也.... 那是小型分光 测的是ATGC 04/24 19:32
8F：→ andy731:你若不信~你可以拿ADP AMP ATP的粉末 溶在水里去测 04/24 19:33
9F：→ andy731:一样有值!! 所以他不能代表品质~品质要用电泳 04/24 19:33
10F：→ andy731:至於DNA的问题~真的担心的话...就得用DNase去切 04/24 19:34
11F：→ crazyrange:原来是这样阿,感谢A大,终於恍然大悟了 04/25 09:32