作者belady (白衣天使黑心肝)
看板Biotech
标题Re: [求救] 关於real-time PCR的问题
时间Thu Apr 24 23:47:13 2008
如果怀疑有污染到geno,mic DNA的话
可以设计一段noncoding region的primer
直接将cDNA以此段primer进行PCR
如果有放大出noncoding region的话就表示cDNA有被污染
我们实验室有另外买DNase去作用RNA在翻成cDNA
如果你要的话 我再给你厂商跟货号
※ 引述《crazyrange (热血羽球)》之铭言：
: 我在萃取RNA之後 没有用DNase
: 结果我在测量RNA量的时候 我也同时去测量DNA的量
: 的确也侦测到了DNA的量 而且还不低
: 我想请问一下
: 在我抽取的RNA中还有DNA的话
: 对於我接下来要做的RT会有很大的影响吗?
: 我是这样想的
: RNA是单股 DNA是双股
: 可是在跑RT的时候 加入的过程中DNA会分解成单股
: 而加入的primer是random primer
: 这样的话在做RT的时候 DNA是不是也会被反转录?
: 那如果在萃取完RNA後加入DNase去反应
: 是否之後在测量RNA浓度的时候就会测不到DNA的存在?
: 在RT之後的cDNA需要测cDNA浓度吗?
: 还是说因为在跑RT之前的RNA就已经是固定量(ug)
: 所以RT出来的cDNA可以不用测 不同sample可以直接用同量(ul)的template
: 去跑real-time PCR?
: 整个疑惑
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