作者greenmoon00 (苍天之月)
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标题Re: [求救] flow的一些小撇步!!
时间Fri Apr 25 13:43:54 2008
※ 引述《asthma (asthma)》之铭言：
: ※ 引述《ruthwu (Ruth)》之铭言：
: : 欲用flow来看细胞的apoptosis
: : 目前是用AnnexinV-PE & 7AAD进行双染 (BD的apoptosis kit)
: : 有些部分想请问一下:
: : 1.收细胞前的wash,到底该用冰的PBS还是室温的??
: 皆可
这边我是用冰的...後来的步骤也会尽量维持低温
: : 2.直接冲下??还是以EDTA冲下??
: ?
收细胞吗?? 以不要对细胞产生伤害的方法最好
细胞的破损会让染核酸的染剂失准
: : 3.resuspend cells in 1x binding buffer(是冰的还是室温呢??)
: 你应该是用kit, 4度C 比较适合 因为下一个步骤是........
: : 在实验中,control cell(without treatment)进行单染setting时
: : 发现Annexin positive细胞占了50-60%
: : 同时7AAD positive细胞大约才20%
: : 感觉是Annexin signal超强
: 染7-AAD 跟 Annexin V 的意义不同, 你了解之後就会发觉原因了
: 你的结果很正常 ^^
我比较有疑问的是为啥使用control cell来进行单染
通常单染是为了进行校正 除非你的control cell是死很多的
否则一般来说应该会使用有处理的细胞进行单染
如果control cell会被染到这麽多 那cell可能不太健康吧
: : (1*10^5 cells/100ul+3ul dye)
: : 请教各位有经验的大大,给予指点迷津吧!!
: : 感激不尽!!
: Good luck
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◆ From: 140.120.208.3
1F：推 linwei:有个小疑问耶 就是说收cell viability 的时候会要求PBS 04/27 00:14
2F：→ linwei:要是冰的，细胞才不会死亡！不过平常使用medium时又要求 04/27 00:14
3F：→ linwei:要回温完全到37度才可以使用～这要会不会有点矛盾阿? 04/27 00:15