※ 引述《lail (逃避不是办法阿)》之铭言： : 前面看到有板有在推文中提到 : western要辨认磷酸化蛋白质时 : 比较不建议用脱脂牛奶blocking : 建议用BSA blocking : 刚好最近我也在看不同的磷酸化蛋白质 : 其中我观察的p-JNK讯号非常弱 : 虽然我要比较的差异一直存在 : 但是整体而言讯号弱到我需要一抗二抗浓度加强 : 二抗作用时间也需要加长 : 这样的现象会是因为我用脱脂牛奶blocking有关吗? : 我若改用BSA blocking会改善吗? : 另外,使用的BSA是用哪种溶剂泡呢(1X TBS? TBST?) : 谢谢^^ 用牛奶也可以阿 你的磷酸化抗体是哪一家的 如果是圣诞老公公的 我为你默哀... 我用圣诞老公公的抗体压两个月都压不好... 但是借用隔壁实验室cell signaling的抗体 压一分钟左右就出来了 讯号还不错 如果还是要用圣诞老公公的抗体的话 我学长的做法 一抗overnight(冷房) 二抗3~4小时 wash久一点 ECL後压片20~30分钟 如果还是没讯号... 那就重新跑一片吧 感觉圣诞老公公的磷酸化抗体很两光 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.177