作者kakaman (日子过的真快阿)
看板Biotech
标题Re: [求救] 2D真难搞
时间Sun Apr 27 15:04:30 2008
※ 引述《kakaman (日子过的真快阿)》之铭言：
: 做了好几遍
: 出现的状况都一样
: 就是点很少 超极少... 少到不敢拿给老师看...
: 查了2D的trouble shooting
: 发现原因可能有几个:
: 1.定量错误 这点已经排除了 拿去跑western染银染染的出来
: 2.buffer:这点应该也排除了 有跟其他实验室拿他们的buffer来跑
: 3.有干扰物:怀疑是sample核酸过多导致我的点看起来只有少数5.6点...
: 因为实在没什麽经验而且实验室也没有经验丰富的人
: 所以至今还在不停的找问题在哪 但是做了又做 问题好像还是一样
: 可以请板上有经验的大大们给我指点迷津吗?
: 谢谢 烦恼好久了~~
sample的处理是把细胞离下来後
用lysis buffer(CHAPS+Urea)+PMSF去破细胞
放在冷房摩天轮转一个小时
接着13000rpm 20min
吸上清液 定量後上IEF
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.118.177
1F：推 Proteomics:我抽植物蛋白质几乎花掉半天在洗蛋白质....你的方法让 04/27 15:19
2F：→ Proteomics:我觉得有许多干扰物都还去乾净就急着做IEF!! 04/27 15:20
3F：→ kakaman:可以请问一下清洗蛋白的步骤吗 04/27 16:32
4F：推 Proteomics:我们是用acetone沉淀protein~再用acetone反覆清洗震荡! 04/27 21:54