作者bunman ()
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标题Re: [求救] Nested PCR
时间Sun Apr 27 17:58:09 2008
※ 引述《fgyfgy (fgyfgy)》之铭言：
: 时间: Sun Apr 27 12:12:57 2008
: 最近看一篇PAPER
: 介绍nested PCR能提高sensitivity和specificity
: 文中附一张图
: 将first PCR 和 nested PCR的产物跑电泳
: 但first PCR跑出的电泳却无结果产生
: 只有 nested PCR 有结果
: 我把first PCR没有结果解释成因为它的specificity不高
: 所以电泳跑不出来
: 不知道对不对
: 希望版众能帮我解除疑惑
: 谢谢
我认为你说的专一性不高是原因之一
但最主要的应该是first PCR所用的DNA中之目标片段浓度太低
所以产物相对少 少到电泳看不到也还算正常
後续将first PCR产物稀释再进行nested PCR确实对於专一性以及产物放大有实质帮助
这是我自己本身的经验
有错还请大家指正
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.60.67
1F：推 elgase:you got it! 04/28 11:21
2F：推 yaliu:想请问，如果再拿同组primer进行第二次PCR是可行的吗？ 04/29 00:29
3F：→ yaliu:好像没做成功过...原理来说应该是没问题吧？！ 04/29 00:32
4F：→ yaliu:还是我技术有问题= = 04/29 00:33
5F：→ bunman:可以啊...那叫做booster PCR 第一次产物记得稀释... 05/03 13:29