作者leoblack (朋友看太重的猫)
看板Biotech
标题Re: [求救] SYPRO Ruby染色问题!?
时间Tue Apr 29 00:32:52 2008
: ◆ From: 140.127.160.142
: 推 leoblack:用reuse的Sypro Ruby真的会有色素沈淀~换新的就ok了 04/28 15:17
: → leoblack:我们家作CoIP也是用Sypro Ruby染色~每次都会用新的 04/28 15:18
: → leoblack:另外,我们都会包头巾带手套口罩,减少灰尘跟keratin的沾粘 04/28 15:18
: → leoblack:如果还是不能改善~恐怕得从"配胶跑胶"那边下手,想办法用 04/28 15:19
: → leoblack:乾净一点的Q水or buffer来配~fix时也用乾净的盒子盛装~ 04/28 15:20
: → NightAmades:我用新的也是会有胡椒颗粒~>"< 04/28 22:04
: → NightAmades:盒子都会用洗乾净的盒子..buffer也是用二次水配 04/28 22:04
: → NightAmades:嗯...会试试看戴头巾..及口罩 04/28 22:05
: → NightAmades:不过...染的时候用微波炉的方式跟O/N 哪个比较好!? 04/28 22:07
: → NightAmades:看产品protocol说用微波炉会比较少胡椒颗粒~ 04/28 22:08
: → NightAmades:再请问leo大..您都完全不会出现胡椒颗粒吗? 04/28 22:10
: → NightAmades:不知道SYPRO Ruby的厂牌会不会有影响!?...我用莱富的~ 04/28 22:11
我不敢说"完全没有胡椒颗粒"
但是我会尽可能地想办法减少
http://www.wretch.cc/album/show.php?i=leowind&b=2&f=1091764481&p=1
但是我看不懂什麽是微波炉?!^^"
我们家是将CoIP後的band跑1D胶後
将我们所要的band切下来,要去送LC/MS/MS
所以有没有东西沾粘上PAGE对我们而言很重要
所以我们会用乾净的容器盛装(如装6 well dish的塑胶盒)
以保鲜膜罩着,然後fix(40%MtOH+10%Acetate)跟wash(Q水)
染Sypro Ruby时会在4℃ o/n(怕protein degrade)
要确定PAGE在里面可以自由滑动,且不会接触到保鲜膜,也不会"搁浅"
不然一样会有色素沈淀
等染完後会用Q水再wash一次,然後再用fix buffer destain
再用Q水wash 2次,换乾净的Q水後放於4℃冰箱
我们家invetrogen跟sigma的都有在用,效果都还ok~
使用前不会特别滤过或什麽的~就直接倒来用了~
希望这样讲对你来说有帮助~^^"
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.109.40.22
1F：推 NightAmades:嗯!微波炉染法是SYPRO Ruby快速染胶方式 04/29 10:03
2F：→ NightAmades:具产品所提供的protocol及说明..是说可以减少背景 04/29 10:04
3F：→ NightAmades:和胡椒颗粒 04/29 10:05
4F：→ NightAmades:嗯!我看了您的图..我染的好的时候差不多像这样或更好 04/29 10:06
5F：→ NightAmades:所以是无法避免吗?因为用其他染色方式不会有胡椒颗粒 04/29 10:07
6F：→ leoblack:个人觉得"PAGE不要搁浅"和"不要有异物接触(如保鲜膜沾粘) 04/29 13:49
7F：→ leoblack:都可以改善很都~不过似乎不能"完全避免",有考虑改银染嘛? 04/29 13:50
8F：→ leoblack:像我要印在论文里的图就会改用银染,但作实验时用Sypro染 04/29 13:51
9F：推 NightAmades:我应该不会考虑银染...因为需要挖点以及比较差异 04/29 17:18
10F：→ NightAmades:所以银染所带来的多变异性是让我不考虑进去的原因 04/29 17:19