作者zeratul1396 (萨加利亚)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质透析完沉淀了......
时间Tue Apr 29 16:47:38 2008
小弟的最近再做酵素的功能分析
打算用低盐浓度做测试(之前是用高盐)
所以我先用透析膜将蛋白质由原先的buffer
Tris-20mM NaCl-300mM imidazole-200mM
透析到
Tris-20mM NaCl-20mM
然後
蛋白质就全部沉淀了
我试着离心以後取上清液来测量浓度
只剩下150 ng/ul左右
之後
我试着两次透析 先透析到中盐 150mM 再到低盐 20mM
结果还是一样
请问
各位前辈有什麽方法可以帮我解决这个问题呢?
感激不尽 谢谢
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滚!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.98.221
1F：推 rnoptrjq:有试过在透析中加beta-mercaptoethanol or DTT吗？ 04/29 22:52
2F：推 aggaci:很好奇 为啥要加？打断双硫键？ 04/30 01:33
3F：推 rnoptrjq:使用高浓度时可以打断双硫键，相反低浓度时可以稳定蛋白 04/30 12:47
4F：推 wulala1995:imidazole浓度不能一次降到0,要慢慢降..200/100/50/0 05/01 00:54
5F：→ wulala1995:这样应该就能解决你沉淀的问题 05/01 00:55
6F：→ zeratul1396:恩~谢谢各位 那我试试看了 05/01 19:17
7F：推 pupuwu:推慢慢降喔~ 时间间隔最好超过两个小时 05/10 03:20