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标 题有关his-tag纯化
发信站交大生科劲公园 (Wed Apr 30 01:03:17 2008)
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想请问一下各位先进
在纯化蛋白质中，我要纯化his-tag的融合protein，使用的是Ni-NTA来纯化，
想请教的部分就是：
1.为什麽buffer的ph值是保持在7.9呢?
2.binging buffer中有的会加入imidazole,这个物质不是只和histidine竞争Ni，为什麽
会用在binding buffer里呢?(其实也想问一下binding buffer的功能是什麽)
3.elution buffer中有imidazole我能理解，可是washing buffer中为什麽也有呢?
实验室使用的imidazole浓度分别为：
8X binging buffer：40mM imidazole
8X washing buffer：480mM imidazole
4X elute buffer：4M imidazole
求救一下了>"<
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有空多帮点XD
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